Génétique moléculaire

Extraits

[...] Sujet II : Génétique moléculaire eucaryote : 1. Représentez les différents ARN primaires et matures du gène Dm. Vous indiquerez sur votre schéma la position des codons de début et de fin de la traduction ainsi que les séquences UTR sur les ARN matures. Les différentes ARN primaires et matures du gène Dm sont représentés à la suite, à noter que l'ARN primaire, numéroté 1 par nos soins, correspond après épissage à l'ARN mature portant le même numéro. Sont représentés le codon de début et le codon de fin de la traduction, notés respectivement « ATG » et « Stop », ainsi que les séquences UTR et sur les ARN matures. [...]

[...] Quelle est son utilité ? -Schématiser ce que le chercheur observera à l'issue de l'électrophorèse pour chaque digestion enzymatique en indiquant clairement les tailles des différentes bandes obtenues pour pScaS et pFE4. Cette expérience de digestion enzymatique, en simple digestion avec BamHI et une double digestion avec HindIII et XbaI, correspond à l'étape de sélection des clones recombinants obtenus par restriction enzymatique. La simple digestion avec HindIII correspond à une étape de vérification de la linéarisation du plasmide et de vérifier sa longueur totale par rapport au vecteur de clonage, tandis que la double digestion HindIII et XbaI permet de vérifier la bonne insertion de la séquence codante dans le plasmide, comme attendu. [...]

[...] Justifiez votre réponse. Le gène Dm code pour deux protéines différentes : -La première version protéique est obtenue après traduction des ARN matures précédemment référencés numéros 1 et et est composée des séquences codantes comprises dans les exons et entre le codon d'initiation (ATG) et le codon Stop. La différence entre les deux ARN matures numéro 1 et 2 est la séquence UTR, qui n'a cependant aucune incidence sur la nature de la protéine finale produite. -La deuxième version protéique est obtenue après traduction de l'ARN mature précédemment référencé numéro et est composée des séquences codantes comprises dans les exons et entre le codon d'initiation (ATG) et le codon Stop. [...]

[...] Nous savons que scaS code pour une protéine impliquée dans la survie de P. mirabilis en présence d'une quantité importante de cuivre, et que le gène scaY de fonction inconnue est retrouvé dans toutes les souches contenant le gène scaS. Pour en savoir davantage, une étude des fusions transcriptionnelles de scaS-lacZ et scaY-lacZ notamment dans des souches sauvage (WT). Nous pouvons voir que dans une souche sauvage, l'activité b-galactosidase de la fusion transcriptionnelle de scaY-lacZ est de 3000 unités en absence comme en présence de cuivre, tandis que l'activité b-galactosidase de la fusion transcriptionnelle de scaS-lacZ est de 90 unités en absence de cuivre et 1900 en présence de cuivre. [...]

[...] Comment être sûr que ces clones contiennent bien le vecteur recombinant ? Afin de sélectionner les clones recombinants obtenus après transformation du plasmide pScaS, il s'agit d'étaler les bactéries sur un milieu sélectif contenant de la kanamycine. En effet, le vecteur de clonage (figure et donc le plasmide pScaS contiennent une cassette de résistance pour la kanamycine, notée « Kanamycine ». Pour être sûr que ces clones contiennent bien le vecteur recombinant, il faudrait alors effectuer un crible en effectuant soit une étape de PCR avec une amorce localisée dans l'insert d'intérêt (ici, la séquence scaS) et une amorce localisée dans le vecteur, soit une vérification par digestion enzymatique afin de vérifier si, après digestion, les fragments obtenus coïncident avec la cartographie du plasmide. [...]