L'alcool déshydrogénase (ADH) est une enzyme nécessaire au bon fonctionnement de l'organisme des mammifères. En effet, cette enzyme est une oxydoréductase qui permet de détoxifier l'éthanol chez les mammifères. Cette enzyme, l'ADH (ADH pour Ethanol-NAD+-oxydoréductase) appartient à la classe des oxydoréductases (EC.1).
Sommaire
Gamme étalon
Activité ADH en fonction de la concentration en éthanol
Activité ADH et spécificité des substrats et des cofacteurs
Influence de l'orthophénantroline sur l'activité ADH
Thermodénaturation de l'ADH
Gamme étalon
Activité ADH en fonction de la concentration en éthanol
Activité ADH et spécificité des substrats et des cofacteurs
Influence de l'orthophénantroline sur l'activité ADH
Thermodénaturation de l'ADH
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Extraits
[...] Ceci explique pourquoi l'absorbance du tube J est à 0. Pour le tube L : nous avons une absorbance mais relativement basse, presque égale à 0. Dans ce tube, nous avons mis un bon substrat (l'éthanol à 3 mol/L) ; grâce à la partie 2 du TP, nous savons que ce substrat est le substrat idéal de notre enzyme ADH. Or ici, l'absorbance est presque à la réaction enzymatique n'a pas fonctionné. En effet, afin de fonctionner correctement, l'enzyme a besoin de son cofacteur : le NAD+ , et dans ce tube nous avons rajouté, en plus du NAD+, un autre cofacteur : le NADP+. [...]
[...] Il est important de noter que cette enzyme fonctionne à une température de 30 degrés et est dénaturée à une température de 75 degrés. Ces températures seront correctement suivies afin que le TP se déroule dans les meilleures conditions possibles. 1. Gamme étalon: Le graphique représentant l'absorbance en fonction de la concentration, appelé droite (ou courbe) d'étalonnage, permet de déterminer la concentration d'une solution inconnue à partir de la mesure de l'absorbance de solutions de concentrations connues (en faisant la projection sur la droite). [...]
[...] Pour les tubes B et J : leur absorbance est à ceci peut s'expliquer par le fait que l'enzyme ne reconnaît pas le substrat qu'on lui donne. Nous avons étudié l'ADH en présence d'éthanol (substrat) lors de la deuxième partie de ce TP. On rappelle la structure de l'éthanol : Comparons la avec la structure du Méthanol et du Chloro-éthanol : La structure du Méthanol est différente de celle de l'éthanol, en effet, il y a un Carbone en moins sur le Méthanol, ainsi, l'enzyme ADH est incapable de reconnaître ce substrat, c'est donc une enzyme assez sélective. [...]
[...] Nous pouvons en conclure que notre enzyme ADH a une "limite" : son substrat est l'éthanol, mais, lorsque l'éthanol est trop concentré, l'enzyme sature et n'est plus capable d'utiliser tout l'éthanol. C'est pourquoi, quand la solution d'éthanol est trop concentrée, ou 10 mol/L par exemple) l'enzyme ADH sature et devient incapable d'utiliser tout l'éthanol, ainsi, la concentration en produit (acétaldéhyde) dans les tubes 8 et 10 sera presque équivalente à la concentration en produit dans le tube 6 (car l'absorbance est quasiment la même pour ces trois tubes, on arrive à un "plateau"). [...]
[...] Nous remarquons alors une chose : par couple, les tubes possédant l'absorbance la plus basse sont ceux où nous avons rajouté l'Orthophénanthroline à 50 mmol/L. Ceci est vrai pour tous les couples. Ainsi, comme les absorbances des tubes d et f sont plus basses, nous pouvons en conclure que la réaction enzymatique concernant l'ADH fonctionnera moins bien dans ces trois tubes. Ces trois tubes possèdent l'Orthophénantroline, nous pouvons donc également en conclure que cette molécule "bloque" la réaction enzymatique, quand l'Orthophénantroline est utilisée, l'ADH fonctionnera moins efficacement. [...]
