Rapport de spectrophotométrie - Chromatographie d'exclusion stérique

Extraits

[...] S'il n'y a pas de protéines, le tube est bleu. La couleur complémentaire du rose-violet étant le vert, il est cohérent de mesurer l'absorbance des solutions à 555 nm (longueur d'onde du vert). Plus la valeur de l'absorbance est élevée, plus la quantité de protéines dans la solution sera élevée. Les résultats obtenus sont les suivants : N° fraction Absorbance mesurée à 555 nm 1 0,002 2 0,002 3 0,020 4 0,177 5 0,445 6 0,714 7 0,501 8 0,218 9 0,048 10 0,010 11 0,006 12 0,002 13 0,001 14 0,001 15 0,001 Les résultats obtenus montrent qu'aucune protéine n'est détectée dans les fractions 1 et 2 (temps d'élution de l'échantillon). [...]

[...] Il varie d'un équipement à l'autre. A partir de la fraction N°3 et jusqu'à la fraction N°9, les protéines sont détectées, avec un maximum pour la fraction N°6 (pour une absorbance de 0,714 UA). A partir de la fraction N°10, il n'y pas de quantité significative de protéines dans les solutions (absorbance faible). On peut donc confirmer que les protéines initialement présentes dans l'échantillon ont été récoltées uniquement dans les fractions N°3 à N°9. Détermination de NaCl Rappel de la partie expérimentale : - 1 ml de chaque fraction collectée sont mis en contact de 5 ml d'eau distillée et en présence de 2 gouttes d'indicateur coloré. [...]

[...] Le titrage par AgNO3 permet de déterminer la teneur en ions donc par extension, la quantité de NaCl. La présence de l'indicateur coloré permet de repérer l'équivalence par un changement de couleur. Les résultats obtenus sont les suivants : N° fraction Volume de titrant AgNO3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0,05 11 0,40 12 1,25 13 1,80 14 1,95 15 2,00 Les résultats obtenus montrent qu'aucun ion Cl- n'est détecté dans les fractions N°1 à N°9 puisque la solution a tout de suite été colorée en marron-rouge. [...]

[...] Concernant le NaCl, il a été récolté progressivement à partir de la fraction N°10. Ces courbes démontrent que le procédé de dessalement a été très efficace. La chromatographie d'exclusion stérique a permis une séparation complète des protéines et du NaCl. En effet, les protéines ont été isolées dans les fractions N°3 à 9 tandis que le sel a été récupéré dans les fractions N°10 à 15. Aucun ion chlorure n'a été détecté dans les fractions des protéines. Les sels sont surtout présents en fin d'élution. [...]