?III-Tubulin Gene Regulation in Health and Disease - Alastair M P Duly, Felicity C L Kao, Wee Siang Teo, Maria Kavallaris (2002)

Extraits

[...] Résultat/message de chaque figure Figure 1. Des lignées stables de cellules embryonnaires humaines de rein qui sont tumorigènes in vivo, exprimant les protéines DDR1a ou DDR1b ont été générées. Ces lignées cellulaires, qui expriment des niveaux comparables de transgène comme observé par cytométrie en flux (figure expriment correctement les protéines DDR1. Ces protéines sont fonctionnelles puisque la stimulation de ces cellules avec du collagène leur ligand, entraîne bien une augmentation de leur forme phosphorylée, comme observé par western blot (figure 1B). [...]

[...] En revanche, dans le cas des cellules qui expriment le récepteur DDR1b et qui sont exposées au collagène le récepteur DDR1b lie la protéine taline et colocalise avec les intégrines b1 activées aux adhésions focales. Il en résulte ainsi la stimulation de la migration cellulaire médiée par les intégrines b1. Par ailleurs, DDR1b lie la protéine BCR, empêchant cette dernière d'hydrolyser le GTP de la protéine Rac1, qui reste ainsi dans un état dit activé, et renforce ainsi la migration cellulaire. [...]

[...] Une modélisation informatique de liaison entre la protéine DDR1b et taline prédit l'implication du domaine intracellulaire de DDR1b (A505-Q541) et le domaine F3 de taline, suggérant ainsi l'implication du motif NPxY du récepteur DDR1b dans l'interaction avec la protéine taline (figure 4A). Par des approches de capture de protéines biotinylées et analyse par western blot, nous pouvons voir que la protéine taline serait plus proche de la protéine DDR1b dans un contexte cellulaire (figure 4B). Des études biochimiques visant à étudier la liaison de peptide protéique, et comme attendu selon la modélisation informatique, il a ainsi pu être déterminé que le domaine cytoplasmique de DDR1b lie de façon plus importante le domaine THD de la protéine taline, avec une affinité plus forte que pour le récepteur DDR1a (figure 4C). [...]

[...] Cependant, la contribution relative de ces deux isoformes dans l'adhésion, la migration et l'invasion reste peu claire. En effet, il a été décrit que la surexpression spécifique de DDR1a dans les cellules de gliome stimule la migration cellulaire et l'invasion, tandis que les deux isoformes sont capables de stimuler la migration cellulaire après stimulation au collagène dans les cellules de carcinomes pulmonaires. Bien que les mécanismes sous-jacents aux différences fonctionnelles entre ces deux isoformes ne sont pas connus, elles diffèrent il existe une différence structurelle entre ces dernières. [...]

[...] Nous pouvons également utiliser cette technique afin d'analyser, lors d'une identification avec a priori, les protéines biotinylées dans le cadre d'utilisation de lignées cellulaires contenant une protéine de type biotine ligase, comme ici la protéine Turbo. -Immunofluorescence et comptage : cette technique permet de visualiser la localisation intra-cellulaire de protéines d'intérêts avec des anticorps spécifiques (comme DDR1, intégrine b1, paxilline). Les cellules sont ensuite analysées par microscope à épifluorescence ou avec un illuminateur à réflexion à fluorescence interne (TIRF). De cette façon, il est possible de pouvoir déterminer la colocalisation de différentes protéines. -Test d'adhésion : elle permet de tester l'adhésion sur des supports constitués de différents substrat (comme le collagène I et le polypeptide DC1-GVMGFP). [...]