Physiologie - Observation de cellules souches issues de souris transgéniques

Extraits

[...] Cre va alors supprimer le codon stop situé entre deux sites loxP, ce qui va activer de façon permanente l'expression de la GFP dans ces cellules et dans toutes leurs cellules filles. Ensuite au cours du temps, ces cellules vont évoluer (migration, différenciation, prolifération) mais vont continuer d'exprimer la GFP, on peut donc visualiser le devenir de ces cellules exprimant initialement K17. Ainsi quand on observe, l'amplification et la diffusion de la coloration verte, cela indique que ces cellules ont fortement proliféré et qu'elles ont migré vers le canal anal. Quelle(s) hypothèse(s) pouvez-vous faire sur le rôle des cellules de la zone de transition anorectale en conditions normales (homéostasie) ? [...]

[...] Comme on sait que les épithéliums se renouvellent grâce aux cellules souches, la zone de transition serait donc un réservoir de cellules souches. - Assurer la cohésion des tissus épithéliaux : L'épithélium anal et l'épithélium rectal sont de types différents. Cette zone de transition peut donc, comme son nom l'indique, faire la jonction entre ces 2 types en ayant des cellules qui ont la faculté de se différencier dans un type ou dans l'autre (cellules souches) Si on vous indique que dans la première expérience, sans marquage avec l'anticorps anti-GFP, vous ne verriez apparaitre que la coloration bleue du DAPI alors que la GFP est à priori une protéine fluorescente, quelles explications pourriez-vous donner ? [...]

[...] Physiologie - Observation de cellules souches issues de souris transgéniques *Les documents concernés sont disponibles sur simple demande auprès du service client. Quels types d'épithélium sont analysés ? Dans les études présentées, les épithéliums étudiés sont ceux constituants des zones de transition épithéliales, c'est-à-dire des jonctions entre deux types d'épithéliums différents. Plus précisément, c'est la zone de transition anorectale qui est analysée. Celle-ci fait la transition entre l'épithélium anal et l'épithélium rectal. L'épithélium anal est un épithélium stratifié tandis que l'épithélium rectal est glandulaire. [...]

[...] Cela peut se produire si le promoteur K17 est faiblement activé. Dans ce cas, le système d'amplification représenté par l'anticorps anti-GFP et l'anticorps secondaire couplé à l'Alexa 488 est nécessaire pour avoir un signal détectable. - Il est également possible que la GFP est perdu sa fluorescence durant la préparation des lames. En effet, la fixation par le PFA ainsi que le traitement par le Triton peuvent dénaturés la GFP et rendre cette protéine non fluorescente. On peut exclure un choix inadapté des filtres présents sur le microscope puisque la GFP et l'Alexa 488 utilisent les mêmes filtres d'excitation et d'émission. [...]